Медведка
Домашняя страница Обратная связь Карта сайта



Экспресс-методы

К ускоренным методам обнаружения МВТ относят метод с помощью индикаторной пробирки BBL MGIT (Mycobacteria Growth Indicator Tube). Рост МВТ происходит в течение 4-10 суток. Пробирки BBL MGIT содер­жат бульон и флуоресцентное соединение, которое реагирует на кисло­род, растворенный в бульоне. Исходная концентрация кислорода не дает яркого свечения. При поглощении кислорода культурой МВТ наблюдает­ся яркая флуоресценция на дне пробирки. Такой результат считают по­ложительным. Если флуоресценция отсутствует или незначительная, то результат отрицательный. Результат учитывают ежедневно, начиная со второго дня инкубации.

Для дифференциации МВТ используют метод газожидкостной хрома­тографии, основанный на высокой разделительной способности различ­ных соединений (аминокислот, нуклеиновых кислот, жиров, углеводов и др.). При этом не исключается этап культивирования возбудителя на питательных средах, что можно отнести к недостаткам метода.

Для идентификации МВТ используют метод моноклональных анти­тел. Сейчас существует более 100 моноклональных антител, полученных методом гибридомной технологии, к эпитопам основных антигенов МВТ. Применениеютих антител в иммуноферментном анализе (ИФА) дает воз­можность быстро дифференцировать вид возбудителя, но пока этот метод применяют в научных разработках для идентификации наиболее часто регистрируемых возбудителей туберкулеза (М. tuberculosis, М. bovis).

Среди молекулярно-генетических методов диагностики туберкулеза чаще всего используют метод ДНК-зондов и полимеразно-цепную реак­цию (ПЦР). В основе этих методов лежат принципы комплементарности нуклеотидных оснований в построении двуспиральной молекулы ДНК. При проведении ДНК-зондирования в случае наличия в исследуемой про­бе специфического участка ДНК МВТ образуется гибрид (двуспиральный фрагмент) ДНК, который исследуют, и ДНК-зонд.

В основе принципа ПЦР лежит многократное увеличение фрагмен­та ДНК. Для амплификации (многократного удвоения гена бактерий) необходимо наличие двух праймеров (затравок) — небольших одноцепочечных фрагментов ДНК, которые соединяются с комплементарным участком одной из цепей матричной ДНК. В дальнейшем происходит достройка этой цепи ДНК-полимеразой. Увеличение количества (в 106 раз) амплифицируемого фрагмента определяют электрофорезом в агаровом геле. Учет результатов осуществляют под пластинами трансиллюминато­ра в ультрафиолетовом свете.

ДНК-зондирование и ПЦР позволяют обнаружить МВТ в диагности­ческом материале в течение 2-4 суток с максимально высокой чувстви­тельностью (10-100-1000 клеток в одной исследуемой пробе).

Читать далее: Иммунодиагностика туберкулеза
Вернуться на главную страницу



Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь
Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо войти на сайт под своим именем.
  Просмотров: 676 Отзывов (0) Распечатать

Наша группа ВКонтакте: